1、柱层析硅胶装柱
    柱层析硅胶操作关键：装柱前柱底要垫一层脱脂棉以防吸附剂外漏。 有干法装柱和湿法装柱两种办法

   （1）干法装柱：将硅胶经过漏斗装入柱内，中心不该接连，形成一细流渐渐参加管内。也可用橡皮槌悄悄击打柱硅胶柱使硅胶装填接连均匀、严密。柱装 好后，翻开下端活塞，然后倒入洗脱剂洗脱以排尽柱内空气，并坚持必定液面。

    （2）柱层析硅胶湿法装柱：将开始预备运用的洗脱剂装入柱内，翻开下端活塞，使洗脱剂缓慢流出。然后把硅胶渐渐接连不断地倒入柱内（或将硅胶与适量洗脱剂调成混悬液渐渐参加柱内，），硅胶依靠重力和洗脱剂的带动，在柱内自在沉降，此间要不断把流出的洗脱剂加回柱内坚持必定的液面，直至把硅胶加完并在柱内沉降不再变化停止。然后在硅胶上面加一小片滤纸或少数脱脂棉。依据加样量操控洗脱剂液面至必定高度。

      柱层析硅胶匀浆法： 搅成匀浆。参加干硅胶体积一倍    的溶剂用玻璃棒充沛拌和。假如洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；假如洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。假如不能搅成匀浆，阐明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，假如不与水配伍走分配色谱的话，有必要预先用无水硫酸钠久置枯燥。氯仿用无水氯化钙枯燥，以除去1%的醇。假如样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
     2、柱层析硅胶上样
     将欲别离的样品溶于少数装柱时用的洗脱剂中，制成体积小、浓度高的样品溶液，参加层析柱中硅胶面上。如样品不溶于装柱时用的洗脱剂，则将样品溶于易挥发的溶剂中，并参加适量硅胶（不超越柱中硅胶全量的1/10）与其拌匀，除尽溶剂，将拌有样品的硅胶均匀加到柱顶（始终坚持洗脱剂有必定的液面），再掩盖一层硅胶即可。上样时注意沿着柱内壁渐渐参加，始终坚持硅胶上端外表平坦；上样量为硅胶的1/60~1/30。
    3、洗脱
    洗脱剂的选用可经过薄层色谱筛选，一般TLC打开时Rf 值为0.2~0.3的溶剂体系是最佳的洗脱体系，选用梯度洗脱法洗脱。 先翻开柱下端活塞，坚持洗脱剂流速1~2滴/秒。上端不断增加洗脱剂（可用分液漏斗操控增加速度与下端流出速度附近）。如单一溶剂洗脱作用欠好，可用混合溶剂洗（一般不超越三种溶剂），一般选用梯度洗脱。洗脱剂的洗脱能力由弱到强逐渐递加。
    4、搜集处理等份搜集洗脱液，每份搜集量大概与所用硅胶的量适当。每份洗脱液选用薄层定性查看，合并   含相同成分的洗脱液。经浓缩、重结晶处理往往可得到某一单体成分。如仍为几个单体成分的混合物，不易分出单体成分的结晶。则需求进一步层析或用其他办法别离。